Un progrès potentiel pour le diagnostic en laboratoire de la brucelloseLa brucellose est l’anthropozoonose la plus répandue dans le monde. La brucellose humaine, quant à elle, est endémique dans de nombreuses régions, notamment dans certaines parties de la Région OMS de la Méditerranée orientale. Plusieurs études ont montré que les tests classiques de réaction en chaîne par polymérase (RCP) pourraient fournir une alternative rapide, sensible et spécifique à la sérologie et à la mise en culture pour le diagnostic de la brucellose.

Les tests classiques de RCP sont principalement utilisés pour diagnostiquer la brucellose aiguë, mais leur intérêt dans les formes focales et les rechutes n’a pas été totalement évaluée. Les chercheurs ont déterminé que la RCP en temps réel est plus rapide et serait plus sensible que la RCP classique. Il n’est pas nécessaire de manipuler les produits de RCP après l’amplification, ce qui réduit le risque de contamination du laboratoire et de faux positifs.

Dans cette étude, trois tests fondés sur la détection par sonde d'hybridation à l’aide de l’instrument LightCycler ont été mis au point et comparés en ciblant l’espaceur transcrit interne 16S-23S et les gènes codant pour omp25 and omp31. Tous les tests ont montré une sensibilité analytique de 100 % et une spécificité de 100 % lors d’essais réalisés sur 28 isolats cliniques consécutifs de Brucella sp. et sur 19 isolats cliniques de pathogènes bactériens courants à Gram négatif and à Gram positif, respectivement.

Le test ciblant l’espaceur transcrit interne a été le plus sensible, avec une limite de détection de 2 équivalents génome par RCP. Ce test a ensuite été validé prospectivement au plan clinique avec 354 échantillons (351 échantillons de sang total et trois échantillons de tissus inclus en paraffine) prélevés sur 340 patients. Sur ce total, 24 échantillons provenaient de patients atteints de brucellose évolutive dont deux cas de rechute, 31 avaient été prélevés chez des patients dont la maladie a été traitée et 299 étaient issus de patients séronégatifs chez qui une brucellose a été initialement suspectée.

La sensibilité clinique, la spécificité et les valeurs prédictives positive et négative du test ciblant l’espaceur transcrit interne étaient respectivement de 66,7 %, 99,7 %, 94,1 % et 97,6 %, contre 77 %, 100 %, 100 % et 97,3 % pour le diagnostic avec mise en culture. La différence de sensibilité entre le diagnostic par culture et la RCP ciblant l’espace transcrit interne n’était pas statistiquement significative (p = 0,71). Dans les deux cas de rechute, la RCP a été positive,  tandis qu’elle a été négative avec les patients traités. Les trois tests effectués sur les échantillons tissulaires ont été positifs, mais les tests omp25 et omp31 n’ont pas détecté l’ADN de Brucella sp. dans les échantillons sanguins. La protéine omp31 n’étant pas présente dans Brucella abortus, ces données indiquent que les 28 isolats testés correspondent très probablement à Brucella melitensis. La RCP ciblant l’espaceur transcrit interne est rapide et pourrait renforcer le diagnostic clinique en laboratoire de la brucellose humaine.

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Source : Mireille M. Kattar et al. Development and evaluation of real-time polymerase chain reaction assays on whole blood and paraffin-embedded tissues for rapid diagnosis of human brucellosis, Diagnostic microbiology and infectious disease, 2007, 23:32 |Résumé de l'article sur PubMed (en anglais)|

Cette étude a reçu le soutien technique et financier du Programme spécial du Bureau régional, qui attribue de petites subventions pour la recherche et la formation sur les maladies tropicales.